1983 yilda ishlab chiqilgan PCR jarayoni DNK sekanslamasini bajarish va alohida genlarda nukleotidlarning tartibini aniqlash imkonini berdi.
Ushbu uslub issiqlik aylanishini yoki DNKni eritishi va replikatsiyasi uchun reaktsiyani qayta isitish va sovutish vositasidan foydalanadi. PCR davom etar ekan, "yangi" DNK replikatsiya uchun shablon sifatida ishlatiladi va DNK shablonini chuqurlashtiradigan zanjirli reaktsiya paydo bo'ladi.
PCR metodlari oqilona muhandislik , klonlash, sud tibbiyoti (DNK barmoq izlari), otani aniqlash, irsiy va / yoki yuqumli kasalliklar diagnostikasi va atrof-muhit namunalarini tahlil qilish kabi biotexnologiyaning ko'plab sohalarida qo'llaniladi.
Sud ekspertizasi, xususan, PCR ayniqsa foydalidir, chunki u eng kichik miqdordagi DNK dalilini oshiradi. PCR shuningdek, minglab yillar bo'lgan DNKni tahlil qilish uchun ishlatilishi mumkin va bu usullar 800 ming yillik mamontdan butun dunyodan mumiyalarga qadar hamma narsani aniqlash uchun ishlatilgan.
PCR protsedurasi quyidagicha:
- Initializatsiya: Bu bosqich faqat issiq boshlovchi PCR talab qiluvchi DNK polimerazlari uchun kerak. Reaksiya 94 dan 96 ° C gacha qizdiriladi va 1-9 daqiqa davomida ushlanadi.
- Denaturatsiya: Agar protsedura boshlashni talab qilmasa, denatüratsiya birinchi bosqichdir. Reaktsiya 20-30 soniya davomida 94-98 ° C gacha isitiladi. DNK shablonining vodorod aloqalari buziladi va bir qator zanjirli DNK molekulalari hosil bo'ladi.
- Tavlanish: Reaksiya harorati 50-65 ° C gacha va 20-40 soniya davomida ushlab turiladi. Primerlar bir iplikli DNK shablonini yutib yuboradi. Bu bosqichda harorat juda muhim. Agar u juda issiq bo'lsa, primer bog'lamasligi mumkin. Agar u juda sovuq bo'lsa, primer nomukammal tarzda bog'lanishi mumkin. Primer tartibi shablonini ketma-ketligi bilan yaqinlashganda yaxshi rish hosil bo'ladi.
- Extension / Elongation: Ushbu qadam davomida harorat polimeraza turiga qarab o'zgaradi. DNK polimerazasi butunlay yangi DNK iplarini sintez qiladi.
- Yakuniy bo'shliq: Ushbu qadam yakuniy PCR aylanishiga keyin 5-15 daqiqa davomida 70-74 ° C da amalga oshiriladi.
- Yakuniy ushlab turish: Bu bosqich ixtiyoriydir. Harorat 4-15 ° C darajasida saqlanadi va reaksiyaga tushadi.
Jarayon uch bosqichga bo'linadi:
- Ustel kengaytirish: Har bir aylanish jarayonida mahsulot (takrorlanadigan DNKning alohida qismi) ikki baravar ko'payadi.
- Tozalash bosqichi: DNK polimerazi faollikni yo'qotib, reaktivlarni iste'mol qilganda, reaktsiya susayadi.
- Yaylada: Mahsulot yo'q.