Enzim kinetiğini o'lchash
Bir oz foniy sifatida, fermentlar reaktsiya uchun aktivizatsiya energiyasini kamaytirish uchun katalizatorlar vazifasini bajaradigan oqsillardir. Aktivizatsiya energiyasi - reaktsiyalarni olish uchun zarur bo'lgan energiya "boshlandi", chunki ko'p reaktsiyalar juda tez (yoki umuman yuzaga kelmaydi), agar ular termodinamik bo'lishi mumkin bo'lsa.
Fermentlar reaktivlar mahsulotlarni ishlab chiqarish uchun reaksiyaga kirib, reaksiyaga kirishadigan ma'lum bir joyda (faol sayt deb ataladi) o'ziga xos reaktsiyalarni katalizlaydi. Substratlar faqatgina o'ziga xos bo'lgan faol saytlarga ega bo'lib, hech qanday boshqa moddalar bir joyda bog'lanmaydi yoki reaksiyaga kirishmaydi. Himoya va kaliti singari, har bir ferment faqat bir reaktsiyaga (ayrim istisnolardan tashqari) ta'sir ko'rsatadi.
Ma'lum faoliyat oqsillarni ajratish usullarida tozalash foizini ko'rsatish uchun ishlatiladi. Fermentlarni sotib olayotganda siz ushbu toza ferment miqdorini aniq belgilash uchun ushbu asbobni bilish muhimdir.
Enzim kinetikasini o'lchashda (fermentning substrat yoki sirt bilan reaktsiyasi darajasi) ferment preparatidagi mg proteini uchun bir vaqtning o'zida, fermentning konversiyasini o'zgartiradigan substrat miqdori (reaktsiyalar katalizatori) sifatida aniqlanadi.
Muayyan faoliyatning namunasi:
- Izolyatsiya qilingan fermentning o'ziga xos faoliyati saflaştırılmadan oldin 150 umol / min / mg oqsili va saflaştırmadan keyin 800 umoles / min / mg da o'lchanadi.
Muayyan faoliyat fermentlarning tozaligining muhim o'lchovidir. Sof fermentning turli xil partiyalari bir xil qadriyatlarga ega bo'lishi va hatto enzimning faollik qiymatlari bo'lishiga qaramay, bir ferment eritmasini ko'p marta bir xil o'ziga xos faollik qiymatiga ega bo'lishlari kerak. Buning sababi, muayyan faollikni hisoblashda, numerator (birlik / ml) va denominator (mg / ml) teng ta'sir ko'rsatadi.
Muayyan faoliyat faoliyatdan juda farq qiladi, lekin ma'lum faoliyatni hisoblash hali faoliyat qiymatiga bog'liq. Bu shuni anglatadiki, belgilangan faoliyat qiymati ham fermentlar bo'linmasiga bog'liq bo'ladi.
Kutilgan muayyan aktivlik qiymatidan kam bo'lgan fermentlarning chanqoqlari o'zgarmaydigan yoki aralashmalar bilan aralashtirilgan enzim molekulalarini o'z ichiga olishi mumkin.
Enzim aktivligiga ta'sir qiluvchi omillar
Turli xil laboratoriyalarda o'lchangan (ya'ni, o'lchov aktivligidagi haqiqiy farqlar, turli xil birlik ta'riflaridan foydalanish natijasida kelib chiqadigan aniq farqlar emas), bir fermentning turli xil o'lchangan faollik qiymatlari bo'lishi mumkin.
Tajriba usuli (fermentlarning sofligini aniqlash uchun sinov usuli) hisobot qilingan faoliyat qiymatiga ta'sir qiladi. Misol uchun, fermentlar, odatda, 20 ° C ga nisbatan 37 ° C haroratlarda ko'proq faol bo'ladi, shuning uchun agar 21 ° C darajasida bir sinov amalga oshirilsa, qiymatlar 32 daraja Selsiydagi haroratda (odatda, , tajribalar 20-37 daraja haroratda amalga oshiriladi).
Shunday qilib, 1 birlik (U) - standart sharoitda daqiqada 1 nmol substrat reaktsiyasini katalizlaydigan ferment miqdori sifatida enzim birligi ta'rifi yaxshiroq ifodalanadi.