Vektorlarning genlar va klonlash bilan qanday aloqasi bor
Molekulyar klonlashda vektor xorijiy genlarni boshqa hujayradan o'tkazish yoki tashish uchun taşıyıcı vazifasini bajaradigan DNK molekuludur va bu erda replikatsiya va / yoki ifoda qilinishi mumkin. Vektor gen klonlash uchun zarur vositalardan biri hisoblanadi va ular, shuningdek, organizmda ularning kiritilishi va ifodalanishini ta'minlash uchun biologik baholashda o'lchab berilishi mumkin bo'lgan bioindikator molekulasini kodlovchi bir xil marker genini kodlashda ham foydali hisoblanadi.
Xususan, klonlash vektori - virus, plazmid yoki xujayralardan (yuqori organizmlardan) olingan DNK, klonlash uchun tashqi DNK fragmenti bilan qo'shiladi. Klonlash vektori organizmda barqaror saqlanishi mumkinligi sababli, vektorda DNKni qulay tarzda kiritish yoki olib tashlash imkonini beruvchi xususiyatlar mavjud. Klonlash vektoriga klonlandikten so'ng, DNK fragmenti yana o'ziga xoslik bilan ishlatilishi mumkin bo'lgan boshqa vektorga quyi klonlash mumkin.
Ba'zi hollarda viruslar bakteriyalarga zarar etkazish uchun ishlatiladi. Ushbu viruslar qisqa muddatga bakteriyofaglar yoki faj deb ataladi. Retroviruslar hayvon hujayralariga genlarni kiritish uchun mukammal vektor hisoblanadi. DNKning dumaloq bo'laklari bo'lgan plazmidlar xorijiy DNKni bakterial hujayralarga kiritishda ishlatiladigan eng ko'p ishlatiladigan vektorlardir. Odatda antibiotiklarga qarshilik ko'rsatadigan genlar mavjud, ular plazmid DNKning ekspreditsiyasi uchun antibiotikli petr plitalari ustida test qilish uchun ishlatilishi mumkin.
O'simlik hujayralariga genin o'tkazish odatda vektor bo'lib xizmat qiladigan va konakçı hujayra ichiga katta plazmid qo'shadigan tuproq bakteriyasi Agrobacterium tumefaciens yordamida keng qo'llaniladi. Antibiotiklar mavjud bo'lganda faqat klonlash vektorini o'z ichiga olgan hujayralar o'sadi.
Klonlash vektorlarining asosiy turlari
Vektorlarning oltita asosiy turi:
- Plazmid. Bakterial hujayradagi mustaqil ravishda kopyalanan dairesel ekstrokromozomal DNK. Plazmidlar odatda hujayra uchun 500-700 nusxada nusha raqamiga ega bo'lgan pUC19 kabi yuqori nusxa raqamiga ega.
- Fage. Lineer DNK molekulalari bakteriyofagin lambdan olingan. O'zining hayot aylanish jarayonini buzmasdan xorijiy DNK bilan almashtirilishi mumkin.
- Kosmiklar. Plazmid va faj xususiyatlarini birlashtirgan yana bir dairesel xromosomal DNK molekulasi.
- Bakterial sun'iy xromosomalar. Bakterial mini-F plazmidlariga asoslangan.
- Achitqi sun'iy xromosomalar. Bu replikatsiya kelib chiqishi bilan birga telomerlar (hujayra bo'linishi vaqtida ajratilgan xromosomalarning uchlarida bir marta ishlatiladigan bir martalik tamponlar), xamirturushli sintromer (opa-singil kromatidlari yoki dyadni bog'laydigan xromosomalarning bir qismi) va tanlab oluvchi marker xamirturush hujayralarida identifikatsiyalash uchun.
Insonning sun'iy xromosomasi. Ushbu turdagi vektor inson hujayralariga genni yetkazib berish uchun potentsial jihatdan foydali bo'lishi va eksperimentlarni o'rganish vositasi va inson xromosomasining funksiyasini aniqlash uchun mo'ljallangan. U juda katta DNK fragmentini olib yurishi mumkin.
Barcha yaratilgan vektor replikatsiya (replikator), klonlash joyi (chet el DNKning kiritilishi, asosiy belgilarning replikatsiya yoki inaktivatsiyasini buzmaydi) va tanlangan marker (odatda antibiotikga qarshilik ko'rsatadigan gen).