Ushbu tampon DNKning elektroforez ajratish uchun ishlatiladi
TBE tampon-moddasi kichik DNK fragmentlarini (MW <1000) ajratish uchun, ayniqsa, cheklash enzimi hazmatlarining kichik mahsulotlarini ajratish uchun foydalidir.
TBE yanada katta tamponlama qobiliyatiga ega va TAE buferiga qaraganda aniqroq piksellar sonini beradi. TAE buferi Tris asosli, sirka kislotasi va EDTA (Tris-asetat-EDTA) dan tashkil topgan eritma.
TBE odatda TAE ga qaraganda qimmatroq bo'ladi va DNKni tozalash va bog'lash bosqichlari mo'ljallangan bo'lsa, DNK ligasini inhibe qiladi. Quyidagi uch oddiy qadam bilan, TBE buferini qanday qilishni o'rganing. Ushbu buferni yaratish uchun taxminan 30 minutdan ortiq vaqt talab qilinmasligi kerak. Quyida qanday qilib:
EDTA ning birja yechimini tayyorlang
EDTA (etilendiamin tetraasetik kislota) eritmasi ilgari tayyorlanishi kerak. EDTA pH qiymati taxminan 8.0 ga o'rnatilgunga qadar to'liq probirkaga kiritilmaydi. 0,5 M EDTA 500 ml'lik eritma uchun 93,05 gramm EDTA disodium tuzini (FW = 372,2) torting. Keyin uni 400 mln. Deiyonlashgan suvda eritib, pH ni NaOH bilan moslang. Shundan so'ng, yakuniy hajmga 500 millilitrni qo'shing.
TBE'ning birja echimini tayyorlang
54 g Tris bazasini (FW = 121,14) va 27,5 g borik kislotasini (FW = 61,83) og'irligi bilan yig'ib (5x) miqdorda TBE eritmasi hosil qiling va taxminan 900 mililitre deiyonize suvda eritiladi. Keyin 0,5 M EDTA (pH 8.0) dan 20 mililitr qo'shing va yakuniy hajmni 1 litrgacha sozlang.
Ushbu eritma xona haroratida saqlanishi mumkin, ammo eski echimlarda cho'kma hosil bo'ladi. Tamponni shisha idishlarda saqlang va cho'kma hosil bo'lganda olib tashlang.
TBE ning ishchi yechimini tayyorlang
Agarozli jel elektroforez uchun TBE bufer 0.5x konsentrasiyasida (konsentrlangan aktsiyaning 1:10 seyreltilishi) ishlatilishi mumkin. Eritma eritmasini 10x deionlashtirilgan suvda tashlang. Oxirgi hal qiluvchi konsentratsiyalar 45 mM Tris-borat va 1 mM EDTA. Tampon, agaroz jelini ishlatishda foydalanish uchun tayyor.
Sizga nima kerak
TBE buferini yaratish uchun siz faqat to'rt moddaga kerak bo'ladi. Ushbu ro'yxatdagi qolgan narsalar uskunalardir. Zarur bo'lgan to'rt modda EDTA disodyum tuzi, Tris asos, borik kislotasi va deiyonize suvdir.
Uskunaga kelsak, tegishli ravishda pH o'lchov va kalibrlash standartlariga ehtiyoj seziladi. Bundan tashqari siz 600 millilitrli va 1500 millilitrli qandil yoki shishalarga ehtiyoj sezasiz. Jihozlaringizning ehtiyojlarini yumshatish shilingan va aralashtiruvchi panjaralar va aralashtirgichlarni tugatdi.
Laboratoriyadagi inventarni tekshiring, siz boshlashingizdan oldin kerakli narsalarga ega bo'lishingizga ishonch hosil qilish uchun foydalanasiz. To'g'ri materiallardan tashqariga chiqib ketganingiz uchun echimni tayyorlashda to'xtamaslikdan ko'ra yomonroq narsa yo'q.
Agar sizning laboratoriya maktabda yoki ish joyingizda bo'lsa, tegishli xodimlar bilan birgalikda ulardagi barcha mahsulotlarga ega ekanligini tekshiring. Shunday qilib, sizni vaqt va energiya tejashingiz mumkin.