Qanday qilib bu immunohistokimyoviy binoni bufferi qilish
Fosfat tamponli sho'r (PBS) immunohistokimyoviy (IHC) binoni uchun keng tarqalgan bo'lib ishlatiladigan bufer eritmasi va biologik tadqiqotlarda tez-tez ishlatiladi. PBS - natriy vodorod fosfat, natriy xlorid va ba'zi hollarda kaliy xlorid va kaliy dihidrogen fosfat o'z ichiga olgan suvga asoslangan tuz eritmasi.
Immunohistokimyoviy boyitish
Immunohistokimyo biologik to'qimalarda antigenlarga bog'langan antikorlarni qo'llash tamoyilidan foydalanib, to'qima bo'lagi hujayralarida oqsillar kabi antijeni aniqlash jarayoniga ishora qiladi.
Immunofluorescent boyitish birinchi immunohistokimyoviy binoni usuli hisoblanadi.
Antigen-antikor bilan bog'lovchi reaksiya tufayli flüoresans bo'yoqlardan foydalangan antikorlar bilan konjuge qilingan hollarda antijenler paydo bo'ladi. Bu jarayon floresan mikroskop ostida ma'lum bir to'lqin uzunligining hayajonli yorug'ligi bilan faollashganda sodir bo'ladi.
Eritmalarning ozmolyarlik va ion konsentratsiyasi inson organizmiga mos keladi - ular izotonikdir.
PBS uchun retsept
PBS ni bir necha usulda tayyorlashingiz mumkin. Bir nechta formulalar mavjud. Ulardan ba'zilari kaliyni o'z ichiga olmaydi, boshqalarida kaltsiy yoki magnezium mavjud .
Ushbu retsept nisbatan oson. 10X PBS (0,1M) eritmasi uchun mo'ljallangan. Shu bilan birga, siz 1X kabinetga echimini yaratishingiz yoki bu 10X retsepti bilan boshlashingiz va uni 1X ga suyultirishingiz mumkin.
Butun jarayon 10 daqiqa davom etadi.
Tween-ni qo'shish imkoniyati ham mavjud.
Siz PBS Buffer qilishingiz kerak
- Natriy fosfat monobazik (suvsiz)
- Natriy fosfat dibazik (suvsiz)
- Natriy xlorid
- Qayiqlarni tortish va tortish
- Magnit karıştırıcı va aralashtirish paneli
- Kalibrovka qilingan pH probi va pHni sozlash uchun mos echimlar
- 1 volumetrik shisha idish
- Tween 20 (ixtiyoriy)
Fosfat tamponlu tuzni qanday qilish (PBS)
10,9 g suvsiz natriy fosfat dibazik (Na2HP04), 3.2 g suspenziya natriy fosfat monobazik (NaH2PO4) va 90g natriy xlorid (NaCI) torting.
Faqat 1 litr distillangan suv ostida eritib oling.
PH qiymatini 7.4 ga sozlang va yakuniy hajmni 1 L ga etkazing.
Foydalanishdan oldin 10X sintizlab, kerak bo'lganda pHni qayta tuzing.
1L eritmasiga 5 ml Tween 20 qo'shib, 0,5 foiz Tween 20 o'z ichiga olgan PBS eritmasi mumkin.
PBS buferini yaratish bo'yicha maslahatlar
PBS yechimini tuzganingizdan keyin bufetani xona haroratida saqlang.
Suvsiz reagentlar almashtirilishi mumkin, lekin qo'shilgan suv molekulalarini joylashtirish uchun har birining tegishli massasini qayta hisoblashingiz kerak bo'ladi.
Fosfat tamponlu tuzning (PBS) ishlatilishi
Fosfat tamponli tuz eritmalari juda ko'p ishlatiladi, chunki u ko'p hujayralarga izotonik va toksik emas. U moddalarni suyultirishda ishlatilishi mumkin va ko'pincha hujayralar konteynerlarini yuvish uchun ishlatiladi. PBS biomolekulyarlarni quritish uchun turli usullar bilan suyultirish vositasi sifatida ishlatilishi mumkin, chunki uning tarkibidagi suv molekulalari modda-oqsil atrofida tuziladi. U "quritiladi" va mustahkam sirtga joylashtiriladi.
PH hujayralarni yo'q qilishning oldini olish uchun barqaror va izchil bo'ladi.
Moddaga bog'langan nozik kino suvi denatürasyonun yoki boshqa konformasyonel o'zgarishlar oldini oladi. Karbonat tamponlari bir xil maqsadda ishlatilishi mumkin, ammo samarasizligi kamroq.
PBS ellipsometriyadagi oqsillarni adsorbsiyasini o'lchashda mos yozuvlar spektrini olish uchun ham foydalanish mumkin.